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信帆生物低价销售酰基转移酶(AAT)试剂盒

阅读次数:22    发布时间:2019/10/30 17:29:52

信帆生物低价销售酰基转移酶(AAT)试剂盒
信帆生物专业提供酰基转移酶(AAT)试剂盒,产品质量稳定,价格优惠,确保销售给客户的产品是能够符合质量标准,适合客户要求的产品。本产品低价促销,数量不多,欢迎老师订购咨询!
测定意义:
AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
测定原理:
AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,同时还原DTNB生成TNB;TNB在412nm有吸收峰,测定412nm吸光度增加速率,来计算AAT活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体100 mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体25 mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1管,-20℃保存。临用前加蒸馏水1mL充分溶解,4℃保存。
试剂四:液体2 mL×1管,4℃保存。
试剂五:粉剂×1管,4℃避光保存。临用前加入试剂二1mL充分溶解,4℃避光保存。
粗酶液提取:
称取约0.1g样品,加试剂一1mL,冰上充分研磨,16000g 4℃离心20min,取上清液待测。
AAT测定操作:
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到412 nm,蒸馏水调零;水浴锅35℃预热。
2. 对照管:依次在500μL EP管中依次加入140μL试剂二、10μL试剂三、20μL试剂四和10μL试剂五,20μL待测液,室温放置10min后于412nm测定吸光度,记为A1。
3. 测定管:依次在500μL EP管中依次加入140μL试剂二、10μL试剂三、20μL试剂四和20μL待测液,35℃水浴15min,加10μL试剂五,室温放置10min后于412nm测定吸光度,记为A2。△A测=A2-A1。
AAT活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
AAT活力单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。
AAT (U prot) = 1000×△A测×V总÷(Cpr×V样) ÷T= 666.7×△A测÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
AAT活力单位定义:37℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。
AAT (U/g 鲜重) = 1000×△A测×V总÷(V样÷V样总×W) ÷T= 666.7×△A测÷W
Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;V总:反应总体积,0.2 mL;W :样品质量;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,15min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
AAT活力单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。
AAT (U prot) = 2000×△A测×V总÷(Cpr×V样) ÷T=1333.4×△A测÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
AAT活力单位定义:37℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。
AAT (U/g 鲜重) = 2000×△A测×V总÷(V样÷V样总×W) ÷T= 1333.4×△A测÷W
Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;V总:反应总体积,0.2 mL;W :样品质量;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,15min。
注意事项:
上清液蛋白质含量需要另外测定。建议购买本公司生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒。

 

信帆生物拥有一支在试剂研发、抗体研究、生产及质量管理方面具有丰富经验的高素质人才队伍。环境优美、整洁,从细胞培养、蛋白纯化、疫苗配制到小容量注射剂、分装及全套生产线。检验仪器均采用国内外*设备。*的厂房设施、精良的仪器设备,从而确保了产品的质量和检测的快速、准确、方便,在同行业中一直名列前茅。产品现货供应,欢迎大家订购咨询。

 

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