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异柠檬酸裂解酶(ICL)检测试剂盒更方便快捷了

阅读次数:18    发布时间:2019/8/26 17:01:55

异柠檬酸裂解酶(ICL)检测试剂盒更方便快捷了



油料作物种子在萌发过程中,通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。在乙醛酸循环这一独特的代谢过程中,异柠檬酸裂解酶是关键酶。在反应系统中,异柠檬酸裂解酶催化异柠檬酸的分解,形成一分子乙醛酸和一分子琥珀酸。


ICL(EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物种子在萌发过程中,通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶。 


ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD,NADH 在 340nm 下有特征吸收峰,监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。 


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样品前处理:

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),15000g,4℃,离心 20 分钟,取上清,置冰上待测。

2、组织处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g ,4℃,离心 20 分钟,取上清,置冰上待测。


注意事项:

1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。

2、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃,取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水,将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。


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